做QPCR需要跑电泳吗
来源:网友推荐 更新:2024-05-18
荧光绝对定量中标准品:指用含有目的基因的质粒,知道质粒的分子量和浓度计算出拷贝数,然后倍比稀释就作为绝对定量的标准品。 获取:把目的基因p出来,然后接到质粒上,转染摇菌扩增,然后再抽质粒,酶切纯化。 最后把纯化的目的基因做个鉴定。
QPCR产物为什么需要跑胶:
1、检测PCR的成功与否
2、可以作为你优化PCR条件的依据
3、可以大概确定你PCR产物的量
宗圣斩蜂蜜:答:可以的。有时候,对结果不太自信的,可以跑琼脂糖电泳,厚一点。
宗圣斩蜂蜜:答:我们做的是基因重组。一般来说提取PCR跑电泳可以得到结果而且比较容易。首先你要知道该真菌的基因组,可以去NCBI查,设计引物再PCR,你可以纯化或不纯化PCR的产物,最后电泳检测。
宗圣斩蜂蜜:答:QPCR 问:什么是QPCR?答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系?答:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获93年...
宗圣斩蜂蜜:答:可以。根据查询分析测试百科网显示,截止到2023年9月10日,电泳分离的是一堆已知的DNA样本,用来作为比照试样。同时用一小部分PCR产物在一边参与电泳,和已知的DNA样本同时进行。PCR反应的产物是DNA。
宗圣斩蜂蜜:答:看你的目的了,要是想知道pcr产物的序列,就是 切胶,回收,连接,转化,挑单克隆摇菌,提质粒,送测序
宗圣斩蜂蜜:答:2. 楼主没说清楚你是做的是普通的PCR(模板DNA)还是RT-PCR(模板RNA)。既然是公司提取的模板,PCR结果一般情况下应该不会受DNA的影响,如果是RT-PCR,质量再好的RNA再使用前都应该跑电泳看看有没降解,而且建议RNA分装保存,避免反复冻融。如果使用前保存完好,应该也不会影响到实验结果。3. 从第...
宗圣斩蜂蜜:答:qPCR和dPCR,它们之间都有什么区别呢? 目前的PCR方法主要可以分为三类: PCR、qPCR和dPCR。 PCR是最原始、最简单的PCR方法,如今仍在被我们广泛使用。使用者只能在PCR反应结束之后,通过凝胶电泳、毛细管电泳等方法对产物进行检测。PCR本身是无法定量的,因为我们只能获得反应结束的样品。通过凝胶电泳只能看出扩增质量、不...
宗圣斩蜂蜜:答:可以直接放在盒子上,管里的酶已经工作完毕,就没有必要放在冰上低温了。做电泳需要和Loading Buffer混匀一起加进点样孔,一般都是6X的Loading Buffer,你买的酶里应该带着的。要看你跑的什么胶了,是聚丙烯胶,还是琼脂糖胶,基本都可以用。要是不着急电泳,放4度保存就行一两个星期应该没问题。
宗圣斩蜂蜜:答:要的。这种时候,一般先跑琼脂糖电泳检测是否提出了高质量的质粒,然后通过PCR检测所提的质粒是否是目的质粒,所以是要的。琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
宗圣斩蜂蜜:答:1、EB,这个要十分的注意。建议手套两层PE。2、溶胶的时候,刚从微波炉拿出来,很烫的,小心烫手。这个你会小心的,哈哈。3、另外,因为胶是重复使用的,而EB是在胶里的,所以,这个也要小心喽。4、总的说来除了EB没啥危险性。